高考生物復習：胡蘿卜的組織培養
來源：網絡資源 2019-05-14 16:24:22
一、實驗目的：
胡蘿卜是細胞和組織培養中常用的經典材料，是教學實驗的良好材料。通過本實驗實訓，要求學生熟悉胡蘿卜離體根培養的基本方法和步驟，掌握愈傷組織誘導的基本技能。
二、實驗原理：
植物體的莖，根，葉細胞一般都具有全能性，在一定條件的營養和激素等條件下，
可以脫分化形成愈傷組織。將愈傷組織轉 接到含有不同激素成分的培養基上，就可以誘導其再分化生成胚狀體或叢芽，進而發育成完整的小植株。植物組織培養的全過程，證明了分化的植物細胞，仍具有形成完整植株所需要的全部基因。
三、實驗用具：超凈臺 解剖刀 刮皮刀 不銹鋼打孔器 培養皿 溫箱
四、方法步驟：
1. 將胡蘿卜用自來水沖洗干凈，用刮皮刀除去表皮1-2mm，橫切成大約10mm厚的切片。以下步驟均在無菌條件下進行。
2. 胡蘿卜片經70%乙醇處理30秒鐘后，用無菌水沖洗一遍，再用、2%的次氯酸鈉溶液浸泡10分鐘，無菌水沖洗3~4次。
3. 將胡蘿卜片放入培養皿中，一手用鑷子固定胡蘿卜片，一手用打孔器垂直打孔，每個小孔打在靠近維管形成層的區域，務必打穿組織。然后從組織片中抽出打孔器，將胡蘿卜組織片收集在裝有無菌水的培養皿。重復打孔步驟，直至收集到足夠數量的組織圓片。
4. 用鑷子取出組織圓片，放入培養皿中，用刀片將組織圓片切成2mm長的小塊，放入裝有無菌水的培養皿中。在整個操作過程中鑷子和解剖刀要多次火焰消毒，冷卻后再使用。
5、將胡蘿卜組織小塊放到滅過菌的濾紙上，吸干水分后接種到培養基表面。注意接種時培養瓶要有一定傾斜度，接種過程中鑷子不要直接在培養基上方完成，以減少污染機會。
6、將培養物一部分置于25。C溫箱中暗培養，另一部分到光照培養室中進行培養，以比較光照和暗培養對愈傷組織誘導的反應。
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